​Première approche : réalisation d’une PCR ciblée sur le gène luc.

1- Sur le site du NCBI, rechercher la fiche correspondant au plasmide pGEM luc.
2- Noter son numéro d’accession : X…………………

3- A partir de cette fiche d’information, repérer la séquence correspondant au gène de la luciférase et enregistrer cette séquence AU FORMAT FASTA dans votre compte-rendu.

4- Préciser l’orientation de la séquence et la position des codons START et STOP.
 

5- Accéder au logiciel Primer3

6- Explorer rapidement les différents paramètres configurés par défaut.
7- Coller la séquence du gène luc dans la fenêtre prévue à cet effet.

8- Imposer les paramètres suivants :

-   Nom de la séquence
-  Taille des produits de PCR (entre 300 et 400 pb)
-  Taille des primers et Tm : conserver les paramètres optimaux par défaut.

9- Cliquer sur « Pick primers »
10- Copier-coller le résultat dans votre rapport (les premières lignes jusqu'à la séquence) et analyser ce résultat en cherchant la signification des différentes informations présentées.

 

 

 

 

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