Objectif :

Choisir deux amorces permettant d’amplifier une portion de gène désirée afin de vérifier la présence d’un plasmide recombinant pGEM 3Z / luc dans des clones bactériens transformés étalés sur un milieu de sélection.

​

​

Les clones présents sur une boîte de Pétri après transformation peuvent être de deux natures :
- Ils sont dits  "transformants" s’ils ont intégré un plasmide ne contenant pas la cassette insérée dans le plasmide
- Ils sont dits "recombinants" s’ils contiennent un plasmide ayant inséré le gène d’intérêt.

​

Outre le criblage des clones par analyse du profil de restriction de l’ADN plasmidique, une autre approche, plus rapide, par PCR, peut être envisagée. Dans ce cas, la recherche d’amorces constitue la première étape.
 

​Deux démarches sont  possibles :

 

1- Réaliser une PCR ciblée sur l’insert cloné dans le vecteur recombinant
2- Réaliser une PCR utilisant des primers (ou amorces) universels spécifiques du vecteur

​

​

Stratégie de clonage du gène luc dans pGEM-3Z